개나무숲

혹시 생물학 전공자 있나요?

7hnetKhi 16 216 1 2020.07.12 21:38

전기영동 공부하는데 이해가 안되는게 있는데

마커 샘플1 샘플 2 샘플3 ''' 이런식으로 넣잖아요

근데 양을 얼마나 넣어야 하는지는 어떤걸로 결정하는건가요??

총량을 6 ul 인 경우가 많은거 같은데 왜 6 ul 이라는 값이 나오는지 모르겠어요

6X loading buffer 어쩌고 저쩌고 하던데 이해가 안가요

그리고 마커나 샘플이나 둘다 같은 양을 넣는거죠?

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16 Comments

ibRLn3jj 2020.07.12 21:59

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예?

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W0BqeMYi 2020.07.12 22:15

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6X loading buffer 이용 시 sample 5 ul + 6X loading buffer 1 ul 합이 6 ul 가 되도록 해줍니다. sample이 10 ul 라면 buffer는 2 ul 넣어줍니다. 따라서 6X 라는 말을 사용합니다. sample과 loading buffer를 섞은 후 전기영동 진행하셔야 합니다.

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7hnetKhi 2020.07.12 22:37

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[@W0BqeMYi] 만약에 sample 10ul를 로딩할거면 sample+buffer = 12 ul 잖아요
그럼 마커도 12 ul 만큼 넣어줘야 하는거예요?

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W0BqeMYi 2020.07.12 23:25

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[@7hnetKhi] dna 확인을 위해서라면 dna marker는 적정량을 넣어주시면 됩니다. 저는 이용시 보통 1.5-2ul 정도 사용합니다. sample의 양과 무관합니다.

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W0BqeMYi 2020.07.12 23:31

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[@W0BqeMYi] dna marker 제품마다 적정 volume이 있을 것입니다.

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7hnetKhi 2020.07.12 22:39

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[@W0BqeMYi] 저번에 보니까 sample 50 ul에 + loading dye 10 ul + EZ stain 10 ul 이렇게 넣던데
저 비율은 어떻게 나오는건지 아시나요?

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W0BqeMYi 2020.07.12 23:29

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[@7hnetKhi] EZ vision을 사용하시는 것 같은데 제가 직접 사용해보진 않아서 정확히 모르겠지만 loading buffer는 dna 염색 시료라고 생각하시면됩니다. 큰 영향은 없고 일정 비율만 맞춰서 진행하면되고 Ez stain은 아무래도 gel 확인을 위해 넣어주는 것 같습니다. 이것 또한 알맞은 비율이나 사용방법이 있을 것이라 생각됩니다.

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7hnetKhi 2020.07.12 23:35

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[@W0BqeMYi] 그 알맞은 비율 같은거는 그 실험실에서 사용하는 시약을 구글에서 검색해보면 적정 비율 같은거를 알려주는건가요?

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W0BqeMYi 2020.07.12 23:39

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[@7hnetKhi] 제일 좋은 방법은 그 제품 프로토콜이나 카탈로그 확인하시면 자세하게 나와있어서 그렇게 하시면 될 것 같고 쉬운 방법은 그 제품을 사용하는 본인 실험실이나 가까운 실험실 사람들에게 사용방법을 물어보면 될 것 같습니다.

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7hnetKhi 2020.07.12 23:53

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[@W0BqeMYi] 박사가 존나 띠꺼워서 안알려줘요 ㅠㅠㅠ

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6omsJapI 2020.07.12 22:19

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전기영동 ㅋㅋ 오랜만에 듣네

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umdBDSy7 2020.07.12 22:43

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6x짜리 1 ul 넣어서 6ul로 맞춰주는건 6배로 희석되니까 저리 넣는거 아님?

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7hnetKhi 2020.07.12 22:48

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[@umdBDSy7] 배수 때문에 희석해서 넣는건 이해했는데 왜 6 ul을 로딩하는건지가 이해가 안감
10 ul 이든 20 ul 이든 넣어도 될텐데 만약에 그렇다면 마커는 얼마나 넣어야 하는지
(로딩하는 샘플+ ez stain+ 기타) 는 얼마나 넣어야 하고 이런 값은 어떻게 결정하는건지

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umdBDSy7 2020.07.12 23:01

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[@7hnetKhi] 나 같은 경우엔 western blot 주로 하는데 전기영동할때 쓰는 제품의 한 lane에 넣을 수 있는 샘플 volume이 25ul라 넘치지 않게 20정도만 넣어줌 한 lane에 넣을 수 있는 양이 정해져있는 거 아니냐?그리고 보통 나는 western blot할때 동일 단백질량 걸어주기때문에 단백질 정량분석한 다음 농도계산해서 동일 단백질량이 들어가게 샘플 양 다르게 넣어준다
마커 같은 경우엔 분자량뿐만 아니라 전기영동한 gel 구분 하려고 양을 다르게 넣긴하는데 잘

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